Tu vytvorte sCRAM (suboptimálny protospacer susedný motív (PAM)-sprostredkovaný CRISPR RNA a Cas12a nukleázou v kombinácii s multienzýmovou izotermickou rýchlou amplifikáciou), rýchlu a extrakčnú-bezplatnú diagnostickú platformu, ktorá deteguje ASFV do 20 minút. sCRAM integruje krok rýchleho uvoľnenia nukleovej kyseliny (40 stupňov, 5 minút) s jednou-reakciou v skúmavke, ktorá kombinuje multienzýmovú izotermickú amplifikáciu (MIRA) a suboptimálnu PAM-sprostredkovanú CRISPR/
Systém Cas12a (37 stupňov, 15 minút), umožňujúci -voľné vizuálne odčítanie údajov pomocou UV svetla alebo laterálnych prietokových prúžkov (LFS). sCRAM demonštruje citlivosť detekcie jednej kópie a nevykazuje žiadnu krížovú-reaktivitu s piatimi bežnými patogénmi ošípaných (PRRSV, PPV, JEV, PCV a PRV). Vyhodnotenie 111 simulovaných a klinických vzoriek (vrátane krvi, plazmy a tampónov) odhalilo 100 % zhodu s qPCR pre UV odčítanie a 98,20 % pre LFS
odčítanie, pričom obe metódy vykazujú 100 % špecifickosť. Jednoduchosť, rýchlosť a prispôsobivosť sCRAM v teréne podčiarkujú jeho potenciál pre decentralizovaný dohľad ASFV v-obmedzených nastaveniach, čím ponúka výkonný nástroj na kontrolu epidémie.
V tejto štúdii sme vyvinuli sCRAM, rýchlu a v teréne nasaditeľnú -platformu na detekciu ASFV, ktorá integruje suboptimálne CRISPR/Cas12a sprostredkované PAM{1}} s multienzýmovou izotermickou amplifikáciou. Test dosahuje citlivosť na jednu-kópiu 1 kópie/ul do 20 minút a nevykazuje žiadnu skríženú-reaktivitu s hlavnými patogénmi ošípaných. Klinická validácia vzoriek krvi, plazmy a výterov preukázala plnú zhodu s qPCR s použitím UV svetla a presnosťou 98,20 % pomocou laterálnych prietokových prúžkov. Vďaka zjednodušenej prevádzke, vysokej citlivosti a špecifickosti a vizuálnej interpretácii výsledkov ponúka sCRAM silný potenciál pre-dohľad ASFV na mieste a širšie{12}}aplikácie{13}}starostlivosti o diagnostiku.
