Systém RPA-CRISPR/Cas12a v tejto štúdii dosahuje rýchlu (30–40 minút), ultra{4}}citlivú (1 kópia/μl) HCMV detekciu zacielením na včasne-exprimovaný gén UL123, čím prekonáva konvenčné metódy pri testovaní klinických vzoriek. Táto inovácia umožňuje včasnú diagnostiku nízko{90}}pacientov, najmä imunokompromitovaných{10}vírusových infekcií a{10}vírusových{{101} zdôrazňuje uskutočniteľnosť diagnostiky-založenej na CRISPR na zlepšenie riadenia chorôb súvisiacich s HCMV{12}}. Jednoduchosť a účinnosť testu zvýrazňujú jeho potenciál ako -nástroja{15}}starostlivosti o nastavenia s-obmedzenými zdrojmi.
Vzory miest amplifikácie RPA a výber súpravy.
(A) Návrh priméru RPA, pokiaľ ide o umiestnenie amplifikačných fragmentov. Šípky označujú polohy báz od začiatku do konca amplifikovaného fragmentu s primérmi P1-P6.
(B) Elektroforézny obraz produktu RPA na agarózovom géli amplifikovaného pomocou 6 súprav HCMV primérov.
(C) Skríning účinnosti amplifikácie súprav RPA od rôznych spoločností. P: Primer, NC: Negatívna kontrola.
Výsledky ukázali, že súprava AmpFuture vykazovala najvyššiu účinnosť amplifikácie.
Porovnanie pozitívnych mier MIRA-CRISPR/Cas12a, metódy fluorescenčnej sondy PCR - a qPCR v klinických vzorkách.
Odobrali sme vzorky krvi a moču od 48 klinických pacientov. Genómová DNA bola extrahovaná z týchto vzoriek pomocou súpravy TIANamp Genomic DNA Kit a výsledky detekcie UL122 boli analyzované pomocou metódy fluorescenčnej sondy PCR-. Pri porovnaní našich výsledkov s klinickými diagnózami naše metódy identifikovali 6 pozitívnych vzoriek, ktoré boli v klinických testoch negatívne.
