Rozšírenie RNA izotermálnej amplifikačnej reakcie je rozhodujúcim procesom pre mnoho aplikácií v molekulárnej biológii, diagnostike a biotechnológii. Ako popredný dodávateľ súprav na izotermické zosilnenie RNA chápeme výzvy a požiadavky spojené s touto úlohou. V tomto blogovom príspevku budeme diskutovať o kľúčových úvahách a stratégiách úspešného rozšírenia reakcií izotermálnej amplifikácie RNA.
Pochopenie Izotermálneho zosilnenia RNA
Izotermálna amplifikácia RNA je výkonná technika, ktorá umožňuje rýchlu a účinnú amplifikáciu cieľov RNA za konštantných teplotných podmienok. Na rozdiel od tradičnej polymerázovej reťazovej reakcie (PCR), ktorá vyžaduje tepelnú cyklovanie, metódy izotermálnej amplifikácie ponúkajú niekoľko výhod vrátane jednoduchosti, rýchlosti a kompatibility s aplikáciami bodu - starostlivosti.
Existuje niekoľko typov metód izotermálnej amplifikácie RNA, ako je amplifikácia založená na nukleových kyselinách (NASBA), rekombináza - podporovaná amplifikácia (RAA) a izotermálna amplifikácia sprostredkovaná slučkou (LAMP). Každá metóda má svoj vlastný jedinečný mechanizmus a vlastnosti, ale všetky zdieľajú spoločný cieľ zosilnenia RNA v relatívne krátkom časovom období.
Kľúčové úvahy o zmene
Kvalita a množstvo činidla
Pri rozširovaní RNA izotermálnej amplifikačnej reakcie je kvalita a množstvo činidiel nanajvýš dôležité. Pre konzistentnú a spoľahlivú amplifikáciu sú nevyhnutné enzýmy vysokej kvality, priméry a ďalšie reakčné zložky. Ako dodávateľ súprav na izotermické zosilnenie RNA zabezpečujeme, aby boli všetky naše činidlá starostlivo vyrobené a kvalitné - kontrolované tak, aby spĺňali najvyššie normy.
Pri škálovaní reakcie sa musí tiež úmerne upraviť množstvo činidiel. Napríklad, ak zvyšujete reakčný objem z 20 ul na 100 μl, mali by ste zvýšiť množstvo každého činidla o faktor 5. Je však dôležité poznamenať, že niektoré činidlá, ako sú enzýmy, môžu mať optimálne koncentrácie, ktoré by nemali prekročiť, aby sa zabránilo potenciálnym inhibičným účinkom.
Reakčný objem a miešanie
Zvýšenie reakčného objemu môže mať významný vplyv na účinnosť zosilnenia. Väčšie reakčné objemy môžu vyžadovať dôkladnejšie miešanie, aby sa zabezpečilo rovnomerné rozdelenie reagencií a cieľovej RNA. Správne miešanie je možné dosiahnuť jemným pipetovaním, vírom alebo pomocou mixéra. Malo by sa však vyhnúť nadmernému zmiešaniu, pretože môže spôsobiť poškodenie nukleových kyselín alebo denaturovať enzýmy.
Odporúčame používať dobre kalibrované pipety a miešacie zariadenia, aby ste zaistili presné a reprodukovateľné výsledky. Okrem toho pri rozšírení reakcie je vhodné vykonať pilotné experimenty s malými mierkami najskôr na optimalizáciu reakčných podmienok a určenie vhodných parametrov miešania.
Regulácia teploty
Udržiavanie konštantnej a presnej teploty je rozhodujúce pre úspešnú izotermálnu amplifikáciu RNA. Väčšina metód izotermálnej amplifikácie pracuje v špecifickom teplotnom rozsahu, zvyčajne medzi 37 ° C a 65 ° C. Pri rozširovaní reakcie je nevyhnutné použiť spoľahlivé vykurovacie zariadenie, ktoré dokáže udržať požadovanú teplotu počas celého amplifikačného procesu.
Naše súpravy na izotermálne zosilnenie RNA sú navrhnuté tak, aby optimálne fungovali v konkrétnom teplotnom rozsahu, a v našich výrobkových príručkách poskytujeme podrobné pokyny týkajúce sa regulácie teploty. Použitie tepelného cyklu alebo vykurovacieho bloku s presnou reguláciou teploty môže pomôcť zabezpečiť konzistentné a efektívne zosilnenie.
Prevencia kontaminácie
Kontaminácia je hlavným záujmom pri akejkoľvek reakcii na amplifikačnú kyselinu nukleovú, najmä pri zmene zväčšovania. Aby sa zabránilo kontaminácii, je dôležité dodržiavať prísne laboratórne protokoly, ako napríklad používanie špecializovaných pipety, nosenie rukavíc a práca v čistom prostredí. Okrem toho môže použitie pozitívnych pipety na vytesnenie pomôcť znížiť riziko kontaminácie aerosólu.
Naše súpravy sú dodávané so všetkými potrebnými činidlami pripravenými - používať formát, ktorý minimalizuje riziko kontaminácie počas prípravy činidla. Odporúčame tiež použiť negatívne kontroly v každom experimente na monitorovanie akejkoľvek potenciálnej kontaminácie.
Stratégie na rozšírenie
Postupné škálovanie
Jednou z najúčinnejších stratégií na rozširovanie RNA izotermálnych amplifikačných reakcií je to, aby sa to robilo postupne. Začnite zvýšením reakčného objemu malým faktorom, napríklad 2 - 3 -krát, a optimalizujte reakčné podmienky v každom kroku. Tento prístup vám umožňuje identifikovať a riešiť akékoľvek problémy, ktoré sa môžu vyskytnúť počas procesu škálovania, ako sú zmeny v účinnosti zosilnenia alebo výskyt ne - špecifických produktov.
Po úspešnom škálovaní na mierny objem môžete postupne zvyšovať objem ďalej, až kým nedosiahnete požadovanú stupnicu. Tento krok - priblíženie k kroku pomáha zabezpečiť, aby reakcia zostala robustná a spoľahlivá počas celého procesu škálovania.
Paralelné reakcie
Ďalšou stratégiou zmenšenia je vykonanie viacerých paralelných reakcií. Namiesto zvýšenia objemu jednej reakcie môžete súčasne spustiť niekoľko menších reakcií. Tento prístup má niekoľko výhod, vrátane zníženého rizika kontaminácie, ľahšieho manipulácie a schopnosti nezávisle monitorovať každú reakciu.
Po dokončení paralelných reakcií sa môžu amplifikované produkty v prípade potreby spojiť. Je však dôležité poznamenať, že prevádzkovanie paralelných reakcií môže vyžadovať viac reagencií a vybavenia, takže je potrebné starostlivé plánovanie.
Naše súpravy na izotermálne zosilnenie RNA
Ako dodávateľ súprav na izotermické zosilnenie RNA ponúkame celý rad produktov vysokej kvality, ktoré sú navrhnuté tak, aby vyhovovali rôznym potrebám našich zákazníkov. Naše súpravy sú ľahko použiteľné, spoľahlivé a poskytujú rýchle výsledky.
Ponúkame tiež súvisiace produkty, ako napríkladMIRA DNA izotermálna rýchla amplifikačná súprava Nukleový kyselina Testovací pás,MIRA DNA Izotermálna rýchla amplifikačná súprava FluorescenciaaMIRA DNA izotermálna rýchla amplifikačná súprava základná. Tieto súpravy sú vhodné pre rôzne aplikácie vrátane detekcie patogénov, analýzy génovej expresie a bodu - testovania starostlivosti.
Záver
Rozšírenie RNA izotermálnych amplifikačných reakcií si vyžaduje starostlivé zváženie niekoľkých faktorov vrátane kvality činidla, objemu reakcie, regulácie teploty a prevencie kontaminácie. Dodržiavaním kľúčových úvah a stratégií uvedených v tomto blogovom príspevku môžete úspešne zväčšiť reakcie izotermálnej amplifikácie RNA a dosiahnuť spoľahlivé a reprodukovateľné výsledky.
Ak máte záujem o kúpu našich súprav na izotermálne zosilnenie RNA alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa rozšírenia vašich reakcií, neváhajte nás kontaktovať a požiadajte o ďalšiu diskusiu a rokovania o obstarávaní. Zaviazali sme sa, že vám poskytneme najlepšie produkty a technickú podporu, aby sme uspokojili vaše výskumné potreby.
Odkazy
- Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, a kol. Izotermálna amplifikácia DNA sprostredkovaná slučkou. Nukleové kyseliny Res. 2000; 28 (12): E63.
- Compton J. Amplifikácia nukleových kyselín - amplifikácia. Povaha. 1991; 350 (6313): 91 - 92.
- Piepenburg O, Williams CH, Stemple DL, Armes Na. Detekcia DNA pomocou rekombinantných proteínov. PLOS Biol. 2006; 4 (7): E204.